HBeAb miễn dịch bán tự động
NGUYÊN LÝ
Mục đích
Phát hiện kháng thể HBeAb (Anti-HBe) trong huyêt thanh (huyết tương).
Nguyên lý
Dựa trên nguyên lý của kỹ thuật ELISA (miễn nhiễm gắn enzym) (VD).
CHUẨN BỊ
Người thực hành
Người thực hành: Cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng thực về chuyên ngành Vi sinh.
Người nhận định và thông qua kết quả: Cán bộ xét nghiệm có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh.
Phương tiện, hóa chất
dụng cụ, hóa chất như tỉ dụ dưới đây hoặc tương đương.
Trang thiết bị
Dàn máy ELISA.
Máy ly tâm thường.
Tủ âm sâu (-20ºC) (nếu có).
Tủ lạnh 24ºC - 8ºC.
Micropipette 100 µl, 1000 µl.
Giá đựng ống máu.
Bộ pipetman 8 kênh (nếu có).
Ống đong có vạch dung tích 25ml, 100ml, 1000ml.
dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)
Định mức sinh phẩm và vật tư tiêu hao cho 20 mẫu/lần thực hành (VD).
|
STT |
phí tổn hóa chất, vật tư tiêu hao |
Đơn vị |
Số lượng |
|
1 |
Bông |
Kg |
0,001 |
|
2 |
Dây garô |
Cái |
0,001 |
|
3 |
Tube đựng bệnh phẩm |
Cái |
1,000 |
|
4 |
Sinh phẩm chẩn đoán |
Test |
1,000 |
|
5 |
Khấu hao sinh phẩm cho chạy chứng, kiểm tra chất lượng |
Test |
0,300 |
|
6 |
Chứng ngoại kiểm âm (nếu có) |
ml |
0,010 |
|
7 |
Chứng ngoại kiểm dương (nếu có) |
ml |
0,010 |
|
8 |
Ngoại kiểm (nếu có)* |
0,020 |
|
|
9 |
Nước cất |
ml |
2,000 |
|
10 |
Đầu côn 1000 µl |
Cái |
0,100 |
|
11 |
Đầu côn 200 µl |
Cái |
1,100 |
|
12 |
Giấy thấm |
Cuộn |
0,100 |
|
13 |
Giấy xét nghiệm |
Tờ |
2,000 |
|
14 |
Sổ lưu kết quả xét nghiệm |
Tờ |
0,001 |
|
15 |
Bút viết kính |
Cái |
0,020 |
|
16 |
Bút bi |
Cái |
0,010 |
|
17 |
Mũ |
Cái |
0,020 |
|
18 |
Khẩu trang |
Cái |
0,020 |
|
19 |
găng |
Đôi |
0,100 |
|
20 |
găng xử lý phương tiện |
Đôi |
0,020 |
|
21 |
áo xống bảo hộ |
Bộ |
0,005 |
|
22 |
Dung dịch nước rửa tay |
ml |
8,000 |
|
23 |
Cồn vô trùng tay nhanh |
ml |
1,000 |
|
24 |
Dung dịch tiệt trùng |
ml |
10,000 |
|
25 |
Khăn lau tay |
Cái |
0,010 |
* Ghi chú: phí tổn ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) ) là 1/50 tổng phí công cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm làng nhàng 2 lần/1 năm).
Bệnh phẩm
Huyết thanh hoặc huyết tương của người bệnh.
Phiếu xét nghiệm
Điền đầy đủ thông báo theo mẫu phiếu yêu cầu.
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Các bước tiến hành thực hành theo công cụ, hóa chất được tỉ dụ ở trên.
Lấy bệnh phẩm
Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (xem phụ lục 2)
chối từ những bệnh phẩm không đạt yêu cầu (xem phụ lục 6).
Tiến hành kỹ thuật
Bộ sinh phẩm MONOLISA HBeAg/Ab Plus Bio-Rad (VD).
|
Các bước |
Xét nghiệm định tính anti-Hbe |
|
1 |
Chuẩn bị sinh phẩm xét nghiệm. Tấm phản ứng, sơ đồ mẫu. |
|
2 |
Nhỏ bệnh phẩm và chứng theo quy trình hướng dẫn của nhà sinh sản. |
|
3 |
Nhỏ dung dịch kháng nguyên trung hòa vào mỗi giếng. |
|
4 |
Ủ tấm phản ứng ở nhiệt độ và trong thời gian hợp theo chỉ dẫn của nhà sản xuất. |
|
5 |
Chuẩn bị dung dịch rửa. Rửa tấm phản ứng theo quy trình hướng dẫn của nhà sinh sản. |
|
6 |
Nhỏ dung dịch cộng hợp vào giếng phản ứng. |
|
7 |
Ủ tấm phản ứng ở nhiệt độ và trong thời kì ăn nhập theo hướng dẫn của nhà sản xuất. |
|
8 |
Pha dung dịch cơ chất theo chỉ dẫn. |
|
9 |
Chuẩn bị dung dịch cơ chất. Nhỏ dung dịch cơ chất vào mỗi giếng phản ứng. |
|
10 |
Để tấm phản ứng trong tối ở nhiệt độ phòng (18 0 C – 30 0 C) theo chỉ dẫn của nhà sản xuất. |
|
11 |
Dừng phản ứng. |
|
12 |
Đọc kết quả ở bước sóng 450/620 nm-700 nm bằng máy đo mật độ quang. |
NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
Điều kiện
NC: Độ hấp phụ của chứng âm (R3).
PC: Độ hấp phụ của chứng dương.
CO: Giá trị ngưỡng.
NCx: Giá trị nhàng nhàng của chứng âm.
NCx = R3 OD / 3.
Loại chứng âm lớn hơn 25% giá trị nhàng nhàng chứng âm. Chỉ được loại 1 chứng âm và tính kết quả theo 2 chứng âm còn lại.
CO = NCx x 0,4.
NCx 0,900.
PC < 0,150.<="p">
OD mẫu
Tỉ lệ = __________
Giá trị ngưỡng
Nhận định, giải đáp kết quả
Mẫu huyết thanh:
+ Dương tính: khi có giá trị tỉ lệ ≤ 0,9.
+ Âm tính: khi có giá trị tỉ lệ 1,1.
Tuy nhiên, thận trọng khi 0,9 < giá="" trị="" tỷ="" lệ="">
Nên làm lại xét nghiệm.
Trường hợp dương tính nên xét nghiệm lại 2 giếng. Nếu có ít ra 1 giá trị dương, mẫu được coi là dương tính.
NHỮNG sơ sót VÀ XỬ TRÍ
SAI SÓT
Có thể xảy ra hiện tượng âm tính giả hoặc dương tính giả, thông thường do:
thực hiện sai các bước trong quy trình hướng dẫn.
Chứng âm và những mẫu bệnh phẩm âm tính bị nhiễm chéo bởi huyết thanh/ huyết tương có nồng độ kháng thể cao.
Cơ chất bị nhiễm bởi các tác nhân oxy hoá (thuốc tẩy, ion kim loại v.v…).
Dung dịch dừng phản ứng bị nhiễm bẩn.
Xử trí
tuân đúng các bước quy trình chỉ dẫn của nhà sinh sản và hướng dẫn về độ ổn định hóa chất xét nghiệm trong bộ sinh phẩm sử dụng.
rà và vệ sinh máy rửa ngay trước và sau khi làm xét nghiệm.
Chia hóa chất (chất cộng hợp, dung dịch hiện màu và dừng phản ứng) vào ống thử sạch trước mỗi lần nhỏ.
Hanya blogger biasa yang suka berkelana di dunia maya mencari seonggok informasi yang kiranya dapat berguna untuk dirinya. Terimakasih telah membacanya.
