NHUỘM SOUDAN III HOẶC IV TRONG DUNG DỊCH ETANOL
NGUYÊN TẮC
Nhận dạng các lipid kỵ nước ở thể lỏng theo cơ chế vật lý vật chuyển một thể có màu (lysochrom) từ dung môi hoà tan (cồn, diacetin, propylen, ethylen glycol, v.v…) vào trong lipid ở trạng thái lỏng.
CHUẨN BỊ
Người thực hành
Bác sĩ phẫu thuật bệnh - tế bào bệnh học: 01
Kỹ thuật viên phẫu thuật bệnh - tế bào bệnh học: 01
dụng cụ, hoá chất
Máy cắt lạnh đã ở dạng sẵn sàng hoạt động
Dao sắc, thớt nhựa sạch, phẳng
Bộ phương tiện phẫu tích bệnh phẩm
Phiến kính, lá kính sạch
Bút chì mềm (để ghi tiếng tăm Người bệnh, mã số tiêu bản trên phiến kính).
giấy dậm, gạc sạch
bít tất tay, khẩu trang, mũ, kính bảo vệ mắt và áo quần bảo hộ.
Chổi lông mềm
Gel cắt lạnh
Gắn lá kính: glycerogel hoặc sirô Apathy
Phẩm nhuộm Soudan III hoặc IV trong etanol
Cồn tuyệt đối.
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Chuẩn bị
Bệnh phẩm sau khi lấy ra từ người bệnh được gửi ngay đến khoa giải phẫu bệnh - tế bào bệnh học.
Kỹ thuật viên tiếp thu, ghi các thông tin về người bệnh vào sổ đăng ký và mã số người bệnh.
Ghi mã số của người bệnh vào phiến kính và dán mã số vào hộp đựng bệnh phẩm.
Cắt lọc bệnh phẩm
Bác sĩ giải phẫu bệnh - tế bào bệnh học quan sát bệnh phẩm, biểu đạt kỹ về loại bệnh phẩm, số lượng, đo kích tấc, màu sắc, thuộc tính, mặt cắt… của bệnh phẩm, xác định vùng tổn thương cần lấy mẫu cắt lạnh.
Động tác lấy bệnh phẩm phải nhẹ nhõm, tránh gây dập nát hay biến đổi do tác động cơ học.
Không kẹp vào vùng định lấy mẫu xét nghiệm, không rửa mẫu mô.
Dùng dao sắc cắt theo một hướng, sao cho đường cắt gọn, không bị dập nát.
kích thước của mảnh mô được cắt tùy theo kích thước của vật gá mẫu bệnh phẩm của máy cắt lạnh, thường nhật kích thước 1 x 1 x 0,2cm.
Số lượng mảnh cắt tuỳ từng trường hợp.
Làm lạnh mẫu bệnh phẩm và cắt mảnh mô
Đặt mẫu bệnh phẩm vào gá đúc lạnh rồi đưa ngay vào vị trí ứng trên thanh làm lạnh (Cryobar) trong buồng làm lạnh của máy, phủ gel cắt lạnh, xoay khối Head tracter đặt lên trên khuôn đúc chứa bệnh phẩm rồi đóng kín cửa kính phía trên buồng máy, chờ cho đến khi khối bệnh phẩm đông cứng (có màu trắng).
Mẫu mô sau khi đã đông cứng được cắt thành những lát thật mỏng. Bắt đầu cắt thô với độ dày từ 10-15 micromet để tạo mặt phẳng. Sau đó điều chỉnh độ dày lát cắt từ 2-5 micromet. Quay máy cắt với nhịp điệu vừa phải.
Kết hợp với chổi lông mềm dàn mảnh mô lên phiến kính.
một mực mảnh mô: (để cấu trúc mô và tế bào giữ nguyên hình dáng và bắt màu thuốc nhuộm), sau khi lát cắt được dàn lên phiến kính, phải được nhất thiết ngay bằng cồn tuyệt đối 95-96 0 hoặc cồn acetic-formol trong 20 giây.
Nhuộm mảnh cắt
Chuẩn bị phẩm nhuộm Soudan III hoặc IV trong etanol
Soudan III hoặc IV: 1g
Etanol 70%: 50ml
Aceton: 50ml
Bảo quản trong lọ nút kín, lọc trước khi sử dụng.
Các bước nhuộm
Mảnh cắt rửa trong nước cất.
Ngâm mảnh cắt vào etanol 70% vài giây.
Ngâm vào trong dung dịch bão hoà Soudan trong cồn 70% trong 5 phút (có thể dùng dung dịch Herxheimer).
Ngâm nhiều lần trong ethanol 70% cho đến khi không còn vết của phẩm nhuộm thôi ra nữa.
Rửa nước cất.
Nhuộm nhân bằng Hemalun hoặc xanh lơ toluidin 0,5%.
Rửa nước cất.
Gắn glyxerogel hoặc sirô Apathy.
KẾT QUẢ
Các lipid kỵ nước trong thể lỏng (triglycerit không bão hoà, cholesterit không bão hoà và acid béo tự do không bão hoà): màu đỏ.
Các cerebrosit nhuộm nhạt
Photpholipid nhuộm rất yếu (Adams, 1965).
Hanya blogger biasa yang suka berkelana di dunia maya mencari seonggok informasi yang kiranya dapat berguna untuk dirinya. Terimakasih telah membacanya.
