NHUỘM XANH PHỔ PERL PHÁT HIỆN ION SẮT
NGUYÊN TẮC
Phản ứng Perl là một trong phản ứng hóa mô kinh điển đầu tiên. Mảnh mô được xử lý bằng dung dịch acid ferrocyanit sẽ diễn tả ion sắt dưới dạng hydroxide [Fe(OH)3] bằng cách hòa tan acid hydrochloric. Sau đó, ion sắt phản ứng với dung dịch ferrocyanide kali để tạo ra phức màu xanh không hòa tan là ferrocyanide sắt (màu xanh Phổ).
CHUẨN BỊ
Người thực hành
Kỹ thuật viên giải phẫu bệnh - tế bào bệnh học: 02
công cụ, hóa chất
dụng cụ, hóa chất chung cho kỹ thuật
Dung dịch khăng khăng bệnh phẩm.
Cồn (70 0 , 80 0 , 95 0 , 100 0 ).
Xylen hay toluen.
Nước cất 2 lần.
Parafin.
Sáp ong.
Albumin + glycerin.
Máy đo độ pH điện tử.
Máy chuyển bệnh phẩm tự động.
Máy đúc khối parafin.
Bàn hơ dùng điện.
Máy cắt lát mỏng (microtome).
Lưỡi dao cắt lát mỏng.
Lò nấu parafin.
Tủ ấm 37 0 và 56 0.
Tủ lạnh.
Điều hòa nhiệt độ.
Tủ hốt phòng thể nghiệm.
Nguồn cấp nước chảy.
Bể nhuộm bằng thủy tinh.
Bể thủy tinh đựng cồn, xylen.
Hộp bằng thép không rỉ đựng parafin.
Khuôn nhựa.
Giá đựng tiêu bản (đứng và nằm ngang).
Cốc đong loại 1000ml, 500ml, 100ml và 50ml.
Ống hút bằng nhựa, quả bóp cao su hút hóa chất.
Kẹp không mấu, kéo.
Cân phân tách.
Giấy lọc.
Phiến kính, lá kính.
Acid picric ngâm, làm sạch phiến kính.
Bôm Canada hoặc keo gắn lá kính.
Kính hiển vi 2 mắt để rà kết quả nhuộm.
Kính phòng hộ, găng các loại, mặt nạ giải phẫu, áo choàng giải phẫu.
công cụ, hóa chất riêng biệt cho kỹ thuật
Phẩm nhuộm (hoặc dùng phẩm nhuộm có sẵn của các hãng hoặc pha như chỉ dẫn ở III.6.1 dưới đây), bao gồm: ferrocyanid kali, acid hydrochloric, đỏ trung tính, đỏ nhanh (fast red).
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
nhất quyết
Bệnh phẩm được lấy ra khỏi cơ thể được nhất quyết ngay trong dung dịch formol đệm trung tính 10% với tỷ lệ thể tích dung dịch khăng khăng nhiều gấp 20 - 30 lần thể tích bệnh phẩm. thời kì cố định từ 2-12 giờ tuỳ theo mảnh bệnh phẩm to hay nhỏ.
Sau nhất định, bệnh phẩm được thực hiện qua các khâu kỹ thuật sau:
Chuyển bệnh phẩm
Vùi parafin
Đúc khối parafin
Cắt và dán mảnh cắt
Nhuộm mảnh cắt
Chuẩn bị phẩm nhuộm
Dung dịch ferrocyanid
1% dung dịch nước ferrocyanid kali 20 ml
2% dung dịch nước acid hydrochloric 20 ml
Lưu ý: chuẩn bị dung dịch ngay trước khi sử dụng
Tiến hành kỹ thuật
Nên có mảnh cắt chứng với nước
Tẩy parafin mảnh cắt bằng 3 bể toluen (hoặc xylen), mỗi bể 2 phút
Chuyển vào các bể cồn 100°, 95°, 80° mỗi bể 2 phút
Rửa trong nước cất 3 - 5 phút
Xử lý mảnh cắt bằng dung dịch acid ferrocyanid mới pha x 30 phút
Rửa kỹ trong nước cất
Nhuộm nhạt nhân bằng dung dịch đỏ trung tính 0,5% hoặc đỏ nhanh (fast red) 0,1%.
Rửa nhanh trong nước cất.
Đẩy nước bằng cồn 95° và 100°.
Làm trong bằng 3 bể toluen sạch
Gắn lá kính.
KẾT QUẢ
Ion sắt: xanh
Nhân: đỏ
NHỮNG SAI SÓT VÀ HƯỚNG XỬ TRÍ
Nênchuẩn bị dung dịch nhuộm ngay trước khi dùng do dung dịch acid hydrochloric mới pha sẽ có tác dụng hiệu quả hơn để tách liên kết protein với ion sắt, đồng thời, nên có mảnh cắt chứng nhuộm với nước.
Trong bước 7, nếu sử dụng vòi nước chảy để rửa sẽ làm cho nền tiêu bản có màu đỏ và sẽ mất độ tương phản của nhân tế bào.
Bước 9 có tác dụng biệt hóa màu đỏ khi khử nước.
Nên tránh các chất một mực có acid hoặc dichromate hoặc các dung dịch acid dùng để khử calci. Các chất phản ứng như vậy có thể làm mất khả năng thủy phân ion sắt của mô, tạo ra kết quả âm tính giả.
Hanya blogger biasa yang suka berkelana di dunia maya mencari seonggok informasi yang kiranya dapat berguna untuk dirinya. Terimakasih telah membacanya.
