NHUỘM ĐEN SOUDAN B TRONG DIACETIN
NGUYÊN TẮC
Nhận dạng các lipid kỵ nước ở thể lỏng theo cơ chế vật lý vật chuyển nhân thể có màu (lysochrom) từ dung môi hoà tan (cồn, diacetin, propylen, etylen glycol, v.v…) vào trong lipid ở trạng thái lỏng.
CHUẨN BỊ
Người thực hành
Bác sĩ giải phẫu bệnh - tế bào bệnh học: 01
Kỹ thuật viên phẫu thuật bệnh - tế bào bệnh học: 01
công cụ, hoá chất
Máy cắt lạnh đã ở thể sẵn sàng hoạt động
Dao sắc, thớt nhựa sạch, phẳng
Bộ dụng cụ phẫu tích bệnh phẩm
Phiến kính, lá kính sạch
Bút chì mềm (để ghi danh tiếng người bệnh, mã số tiêu bản trên phiến kính).
giấy chặm, gạc sạch
bao tay, khẩu trang, mũ, kính bảo vệ mắt và áo xống bảo hộ.
Chổi lông mềm
Gel cắt lạnh
Gắn lá kính: glycerogel hoặc sirô Apathy.
Cồn tuyệt đối
Phẩm nhuộm Đen Soudan B trong diacetin, Kernechtrol.
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Chuẩn bị
Bệnh phẩm sau khi lấy ra từ người bệnh được gửi ngay đến khoa phẫu thuật bệnh - tế bào bệnh học.
Kỹ thuật viên thu nạp, ghi các thông báo về người bệnh vào sổ đăng ký và mã số người bệnh.
Ghi mã số của người bệnh vào phiến kính và dán mã số vào hộp đựng bệnh phẩm.
Cắt lọc bệnh phẩm
Bác sĩ phẫu thuật bệnh - tế bào bệnh học quan sát bệnh phẩm, biểu đạt kỹ về loại bệnh phẩm, số lượng, đo kích tấc, màu sắc, tính chất, mặt cắt… của bệnh phẩm, xác định vùng tổn thương cần lấy mẫu cắt lạnh.
Động tác lấy bệnh phẩm phải nhẹ nhõm, tránh gây dập nát hay biến đổi do tác động cơ học.
Không kẹp vào vùng định lấy mẫu xét nghiệm, không rửa mẫu mô.
Dùng dao sắc cắt theo một hướng, sao cho đường cắt gọn, không bị dập nát
kích thước của mảnh mô được cắt tùy theo kích thước của vật gá mẫu bệnh phẩm của máy cắt lạnh, bình thường kích tấc 1 x 1 x 0,2cm.
Số lượng mảnh cắt tuỳ từng trường hợp.
Làm lạnh mẫu bệnh phẩm và cắt mảnh mô
Đặt mẫu bệnh phẩm vào gá đúc lạnh rồi đưa ngay vào vị trí ứng trên thanh làm lạnh (Cryobar) trong buồng làm lạnh của máy, phủ gel cắt lạnh, xoay khối Head tracter đặt lên trên khuôn đúc chứa bệnh phẩm rồi đóng kín cửa kính phía trên buồng máy, chờ cho đến khi khối bệnh phẩm đông cứng (có màu trắng).
Mẫu mô sau khi đã đông cứng được cắt thành những lát thật mỏng. Bắt đầu cắt thô với độ dày từ 10-15 micromet để tạo mặt phẳng. Sau đó điều chỉnh độ dày lát cắt từ 2-5 micromet. Quay máy cắt với nhịp độ vừa phải.
Kết hợp với chổi lông mềm dàn mảnh mô lên phiến kính.
nhất quyết mảnh mô: (để cấu trúc mô và tế bào giữ nguyên hình dáng và bắt màu thuốc nhuộm) sau khi lát cắt được dàn lên phiến kính, phải được nhất mực ngay bằng cồn tuyệt đối 95-96 0 hoặc cồn acetic-formol trong 20 giây.
Nhuộm mảnh cắt
Chuẩn bị phẩm nhuộm đen Soudan B trong diacetin
Hoà tan đến độ bão hoà Đen Soudan B trong một dung dịch nước có 50% diacetin.
Để trong tủ ấm 55 0 trong cả ngày.
Để nguội.
Lọc trước khi sử dụng.
Các bước nhuộm
Chuyển các mảnh cắt lạnh vào dung dịch nước 50% diacetin, trong 30 giây và lắc đều.
Nhuộm trong dung dịch Đen Soudan B vừa mới lọc trong một giờ.
Biệt hoá nhanh (30 giây) trong dung dịch nước 50% diacetin.
Rửa nước cất.
Nhuộm nhân bằng Kernechtrol.
Rửa nước cất.
Gắn trong glycerogel hoặc sirô Apathy.
KẾT QUẢ
Lipid ở trạng thái lỏng (triglycerit không bão hoà, cholesterit không bão hoà, acid béo không bão hoà, glycolipid và photpholipid) bắt màu đen.
Hanya blogger biasa yang suka berkelana di dunia maya mencari seonggok informasi yang kiranya dapat berguna untuk dirinya. Terimakasih telah membacanya.
