HBV kháng thuốc giải lớp lang gene
MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ
Mục đích
Xác định sự thay đổi trình tự nucleotide trên hệ gen của HBV có can hệ đến kháng thuốc.
Nguyên lý
Dựa trên nguyên lý của kỹ thuật giải trình tự nucleotide.
CHUẨN BỊ
Người thực hiện
Người thực hiện: Cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng thực về chuyên ngành Vi sinh.
Người nhận định và duyệt kết quả: Cán bộ xét nghiệm có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh.
Phương tiện, hóa chất
công cụ, hóa chất như ví dụ dưới đây hoặc tương đương.
Trang thiết bị
Tủ an toàn Sinh học cấp 2.
Máy PCR.
Máy đọc điện di.
Máy giải lớp lang gen.
Máy ly tâm 25000 x g.
Máy ly tâm dùng cho tube 0,2 ml.
Máy ủ nhiệt.
Máy vortex.
Micropipette.
Bộ lưu điện.
dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)
Định mức sinh phẩm và vật tư tiêu hao cho 3 mẫu/lần thực hiện (VD).
|
STT |
hoài hóa chất, vật tư tiêu hao |
Đơn vị |
Số lượng |
|
1 |
Bông |
kg |
0,001 |
|
2 |
Cồn |
ml |
1,000 |
|
3 |
Bơm kim tiêm |
Cái |
1,000 |
|
4 |
Panh |
Cái |
0,0001 |
|
5 |
Khay đựng bệnh phẩm |
Cái |
0,0001 |
|
6 |
Hộp chuyển vận bệnh phẩm |
Test |
0,001 |
|
7 |
Tube đựng bệnh phẩm |
Cái |
2,000 |
|
8 |
Găng không có bột |
Cái |
0,500 |
|
9 |
Sinh phẩm chẩn đoán |
Test |
1,000 |
|
10 |
Khấu hao sinh phẩm cho soát chất lượng |
Test |
1,350 |
|
11 |
EQAS (nếu thực hiện) * |
0,020 |
|
|
12 |
Kit tách chiết DNA từ virus |
Test |
2,350 |
|
13 |
DNA marker |
Bộ |
1,000 |
|
14 |
Primer 1 (bộ primer đặc hiệu) |
ml |
0,0001 |
|
15 |
Primer 2 (bộ primer đặc hiệu) |
ml |
0,0001 |
|
16 |
Primer 3 (bộ primer đặc hiệu) |
ml |
0,0001 |
|
17 |
Primer 4 (bộ primer đặc hiệu) |
ml |
0,0001 |
|
18 |
Ống Eppendorf 1,5 ml |
Tube |
3,000 |
|
19 |
Ống Eppendorf 0,2 ml |
Tube |
1,000 |
|
20 |
Đầu côn 10 µl có lọc |
Cái |
1,000 |
|
21 |
Đầu côn 30 µl |
Cái |
1,200 |
|
22 |
Đầu côn 200 µl có lọc |
Cái |
2,200 |
|
23 |
Đầu côn 1 ml có lọc |
Cái |
3,200 |
|
24 |
Ethanol BDH |
ml |
0,500 |
|
25 |
Water-DEPC Treated |
ml |
2,000 |
|
26 |
Thạch |
Gam |
0,075 |
|
27 |
Ladder |
ml |
0,0025 |
|
28 |
Blue Juice Gel loading dye |
ml |
0,003 |
|
29 |
Ethidium Bromide |
ml |
0,100 |
|
30 |
TAE Buffer |
ml |
0,100 |
|
31 |
Giấy thấm |
Cuộn |
0,100 |
|
32 |
Giấy xét nghiệm |
Tờ |
2,000 |
|
33 |
Sổ lưu kết quả xét nghiệm |
Tờ |
0,001 |
|
34 |
Bút viết kính |
Cái |
0,020 |
|
35 |
Bút bi |
Cái |
0,010 |
|
36 |
Mũ |
Cái |
0,020 |
|
37 |
Khẩu trang |
Cái |
0,020 |
|
38 |
căng thẳng |
Đôi |
0,100 |
|
39 |
căng thẳng xử lý công cụ |
Đôi |
0,020 |
|
40 |
Quần áo bảo hộ |
Bộ |
0,005 |
|
41 |
Dung dịch nước rửa tay |
ml |
8,000 |
|
42 |
Cồn diệt trùng tay nhanh |
ml |
1,000 |
|
43 |
Dung dịch khử trùng |
ml |
10,000 |
|
44 |
Khăn lau tay |
cái |
0,010 |
* chú giải: tổn phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/50 tổng Chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm làng nhàng 2 lần/1 năm).
Bệnh phẩm
Huyết thanh, tổ chức sinh thiết.
Phiếu xét nghiệm
Điền đầy đủ thông báo theo mẫu phiếu đề nghị.
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Các bước tiến hành thực hiện theo Phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.
Lấy bệnh phẩm
Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh: Lấy 3 ml máu vào ống lấy máu diệt trùng có chất chống đông EDTA.
Tiến hành kỹ thuật
Tách chiết DNA tổng số.
thực hành PCR.
Điện di rà sản phẩm.
Giải lớp lang gen.
soát và phân tích trình tự gen kháng thuốc của HBV trên nhà băng dữ liệu gen quốc tế.
NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
Sản phẩm PCR phải có một băng đặc hiệu độc nhất, rõ nét và không bị đứt gẫy. lớp lang DNA của gen không bị nhiễu và phải cho thấy có sự thay đổi một số vị trí nucleotide trên gen ứng với các loại thuốc điều trị HBV.
NHỮNG sơ sót VÀ XỬ TRÍ
Trong trường hợp không có sản phẩm PCR, cần phải soát lại quá trình tách chiết DNA tổng số, chất lượng primers và master mix, và thực hiện lại xét nghiệm.
Nếu lớp lang DNA bị nhiễu cần phải soát lại độ đặc hiệu của sản phẩm PCR hoặc quá trình chạy PCR sequencing bị nhiễm chéo.
Hanya blogger biasa yang suka berkelana di dunia maya mencari seonggok informasi yang kiranya dapat berguna untuk dirinya. Terimakasih telah membacanya.
