HCV Ab miễn nhiễm bán tự động
MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ
Mục đích
Phát hiện kháng thể HCV Ab trong máu.
Nguyên lý
Dựa trên nguyên lý của kỹ thuật ELISA (miễn dịch gắn enzym) (VD).
CHUẨN BỊ
Người thực hành
Người thực hành: Cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng thực về chuyên ngành Vi sinh.
Người nhận định và duyệt kết quả: Cán bộ xét nghiệm có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh.
công cụ, hóa chất
dụng cụ, hóa chất như tỉ dụ dưới đây hoặc tương đương.
Trang thiết bị
Dàn máy ELISA.
Máy ly tâm thường.
Tủ âm sâu (-20ºC) (nếu có).
Tủ lạnh 2ºC - 8ºC.
Micropipet 100µ, 1000 µl.
Giá đựng ống máu.
Bộ pipetman 8 kênh (nếu có).
Ống đong có vạch dung tích 25ml, 100ml, 1000ml.
phương tiện, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)
Định mức sinh phẩm và vật tư tiêu hao cho 25 mẫu/lần thực hành (VD).
|
STT |
tổn phí hóa chất, vật tư tiêu hao |
Đơn vị |
Số lượng |
|
1 |
Bông |
Kg |
0,001 |
|
2 |
Dây garô |
Cái |
0,001 |
|
3 |
Tube đựng bệnh phẩm |
Cái |
1,000 |
|
4 |
Sinh phẩm chẩn đoán |
Test |
1,000 |
|
5 |
Khấu hao sinh phẩm cho chạy chứng, kiểm tra chất lượng |
Test |
0,200 |
|
6 |
Chứng ngoại kiểm âm (nếu có) |
ml |
0,030 |
|
7 |
Chứng ngoại kiểm dương (nếu có) |
ml |
0,030 |
|
8 |
Ngoại kiểm (nếu có)* |
0,020 |
|
|
9 |
Nước cất |
ml |
2,000 |
|
10 |
Đầu côn 1000 µl |
Cái |
1,000 |
|
11 |
Đầu côn 200 µl |
Cái |
1,050 |
|
12 |
giấy chặm |
Cuộn |
0,100 |
|
13 |
Giấy xét nghiệm |
Tờ |
2,000 |
|
14 |
Sổ lưu kết quả xét nghiệm |
Tờ |
0,001 |
|
15 |
Bút viết kính |
Cái |
0,020 |
|
16 |
Bút bi |
Cái |
0,010 |
|
17 |
Mũ |
Cái |
0,020 |
|
18 |
Khẩu trang |
Cái |
0,020 |
|
19 |
bít tất tay |
Đôi |
0,100 |
|
20 |
Găng tay xử lý dụng cụ |
Đôi |
0,020 |
|
21 |
áo xống bảo hộ |
Bộ |
0,005 |
|
22 |
Dung dịch nước rửa tay |
ml |
8,000 |
|
23 |
Cồn vô trùng tay nhanh |
ml |
1,000 |
|
24 |
Dung dịch sát trùng |
ml |
10,000 |
|
25 |
Khăn lau tay |
Cái |
0,010 |
* chú thích: uổng ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/50 tổng phí công cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm làng nhàng 2 lần/1 năm).
Bệnh phẩm
Huyết thanh hoặc huyết tương của người bệnh.
Phiếu xét nghiệm
Điền đầy đủ thông báo theo mẫu phiếu yêu cầu.
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Các bước tiến hành thực hiện theo công cụ, hóa chất được tỉ dụ ở trên.
Lấy bệnh phẩm
Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (xem phụ lục 2).
khước từ những bệnh phẩm không đạt yêu cầu (xem phụ lục 6).
Tiến hành kỹ thuật
Bộ sinh phẩm MONOLISA Anti – HCV PLUS Bio-Rad (VD).
|
Các bước |
Xét nghiệm định tính Anti HCV |
|
1 |
Chuẩn bị sinh phẩm, lược đồ nhỏ mẫu. |
|
2 |
Nhỏ dung dịch pha loãng. |
|
3 |
Nhỏ chứng và bệnh phẩm theo thứ tự chỉ dẫn. |
|
4 |
Đậy tấm phản ứng và ủ ở nhiệt độ và trong thời gian quy định theo quy trình hướng dẫn của nhà sản xuất. |
|
5 |
Rửa tấm phản ứng bằng chương trình theo quy trình chỉ dẫn của nhà sản xuất. |
|
6 |
Nhỏ dung dịch cộng hợp vào các giếng. |
|
7 |
ủ ở nhiệt độ phòng (18ºC – 30ºC) theo chỉ dẫn. |
|
8 |
Rửa phiến nhựa và làm khô. |
|
9 |
Pha dung dịch cơ chất và nhỏ vào mỗi giếng. Để tấm phản ứng trong tối theo quy trình ở nhiệt độ phòng (18ºC – 30ºC) như hướng dẫn của nhà sản xuất. |
|
10 |
Dừng phản ứng. |
|
11 |
Đọc KQ ở bước sóng 450/620 - 700nm bằng máy đo mật độ quang. |
NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
Điều kiện
PC: Độ hấp phụ của chứng dương (R4)
PCx: Giá trị OD trung bình của chứng dương
CO: Giá trị ngưỡng
Tổng số OD của chứng dương
PCx =---------------------------------------
3
1.000 ≤ PC ≤ 2.400 NC < 0,15<="p">
Loại chứng dương PC có giá trị cao hơn 30% so với giá trị PCx .
nối tính kết quả theo 2 chứng dương còn lại.
PCx
CO = -----------
5
Nhận định, đáp kết quả
Mẫu huyết thanh:
Mẫu huyết thanh có OD < co="" được="" coi="" là="" âm="" tính.<="p">
Cần cẩn trọng trong trường hợp mẫu huyết thanh có CO -10%
< od
Mẫu huyết thanh có OD≥ CO cần được xét nghiệm lại.
+ Nếu lần 2 hoặc lần 3 có OD≥ CO, mẫu được coi là dương tính.
+ Nếu 2 lần đều có OD
< co,="" mẫu="" được="" coi="" là="" âm="" tính.<="p">
Có thể xảy ra hiện tượng âm tính giả hoặc dương tính giả, thường nhật do:
thực hiện sai các bước trong quy trình hướng dẫn.
Chứng âm và những mẫu bệnh phẩm âm tính bị nhiễm chéo bởi huyết thanh/huyết tương có nồng độ kháng thể cao.
Cơ chất bị nhiễm bởi các tác nhân oxy hoá (thuốc tẩy, ion kim loại v.v…).
Dung dịch dừng phản ứng bị nhiễm bẩn.
Tuân thủ đúng các bước quy trình hướng dẫn của nhà sinh sản và chỉ dẫn về độ ổn định hóa chất xét nghiệm trong bộ sinh phẩm sử dụng.
kiểm tra và vệ sinh máy rửa ngay trước và sau khi làm xét nghiệm.
Chia hóa chất (chất cộng hợp, dung dịch hiện màu và dừng phản ứng) vào ống thử sạch trước mỗi lần nhỏ.
NHỮNG sơ sót VÀ XỬ TRÍ
sơ sót
Xử trí
Hanya blogger biasa yang suka berkelana di dunia maya mencari seonggok informasi yang kiranya dapat berguna untuk dirinya. Terimakasih telah membacanya.
